1幸园、樣本RNA得率以及各類項目最低起始量
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各樣本Total RNA得率統(tǒng)計(僅供參考):
測序項目推薦起始量(起始量僅供參考,外泌體不允許18s/28s rRNA有峰):
表達譜芯片及小RNA測序體液樣本及外泌體項目起始量(僅供參考)
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2、各類樣本準(zhǔn)備指南
2.1 動物組織/臨床組織采集
① 取新鮮組織,組織體積要小,盡量長寬高≤0.5cm茸俭,考慮到可操作性,所切組織塊的大小可參考綠豆顆粒的大小
② 去除非研究的組織類型(如結(jié)締組織,脂肪組織等)捂臣,如果是臨床病變組織的取材要正確判斷病變以及正常組織,應(yīng)將病變組織周圍的正常組織去掉邓星,反之亦然堡掏。
③ 迅速用2-6℃預(yù)冷RNase-Free水配制的1×PBS或生理鹽水清洗組織表面的血跡和污漬,使用無塵紙巾吸干表面的液體
④ 處理好的組織迅速放入預(yù)冷好的已寫好編號的RNase-Free的帶螺紋口的耐-192℃超低溫凍存管中刨疼,迅速置于?液氮速凍1小時后轉(zhuǎn)存于-80℃長期保存泉唁,在RNA提取前避免反復(fù)凍融。
注意事項:
a. 如果實驗室沒有條件揩慕,如缺乏液氮亭畜、干冰以及-80℃冰箱等條件下扮休,需要RNAlater及類似組織保存液保存的樣本,嚴(yán)格按照操作說明進行拴鸵,迅速的將樣本分割成長寬高≤0.5cm玷坠,約豌豆大小的小塊(一般重約100mg,不過無需精準(zhǔn)測量劲藐,一般需要10個小塊左右)八堡,由于組織塊過大會影響RNAlater滲透入組織內(nèi)部的效率,組織塊過大也會造成RNAlater無法完全覆蓋組織聘芜,而未被RNAlater覆蓋的組織部位極易被核酸酶降解兄渺。然后投入提前準(zhǔn)備好的裝滿RNAlater的1.5mL的EP管中,使樣本完全浸沒在液體中磁揽,然后置于4℃中保存過夜寝典,干冰運輸,或-80℃保存伺亭。
b. 不允許寄送用裂解液保存的組織樣本壮畏,因為實驗中發(fā)現(xiàn)用Trizol保存的組織樣本,無論是研磨好的粉末還是切割好的組織塊藐捉,所抽提的RNA質(zhì)量普遍很差铭歪;
c. 動物及臨床組織不要使用錫箔紙包裹,錫箔紙容易與動物及臨床組織粘一起氛玛,RNA抽提的過程錫箔紙容易帶入搀薛,引起污染。
2.2 細胞樣品的采集
貼壁細胞的處理:
① 從培養(yǎng)箱取出貼壁生長細胞蹂勺,顯微鏡下觀察細胞確定生長狀態(tài)良好棄培養(yǎng)基
② 小心加入與培養(yǎng)基等體積的無酶水配制的1×PBS后稻填,平放1min洗滌細胞,然后棄去PBS携帘,重復(fù)一次
③ 加入適量裂解液反復(fù)吹打至充分裂解(以TriZol為例恰壁,10-15cm的大皿,每次先添加1-2mL旨椒,吹打混勻晓褪,裂解充分的標(biāo)準(zhǔn)為吹打時液體不粘稠,流動性好综慎。如果液體過于粘稠說明還未裂解充分涣仿,需添加裂解液,每次添加的量建議為100μL左右持續(xù)添加示惊,直到液體不粘稠為止)
④轉(zhuǎn)移至?耐-192℃低溫的螺紋口凍存管后好港,-80℃冰箱長期保存,干冰運輸
懸浮細胞的處理:
①選取生長狀態(tài)良好的細胞懸液
②200-1000g離心5-10min米罚,得到細胞沉淀棄培養(yǎng)基
③加入適量 RNase-Free水配制的1×PBS后钧汹,寬口槍頭輕柔吹打重懸細胞沉淀丈探,然后用200g離心5min,棄PBS拔莱, 重復(fù)一次
④加入適量TriZol裂解液反復(fù)吹打至充分裂解(裂解標(biāo)準(zhǔn)同上面的貼壁細胞處理方式類似)
④轉(zhuǎn)移至?耐-192℃低溫的螺紋口凍存管后类嗤,-80℃長期保存,干冰運輸
注意事項:
a. 勿將干凍的細胞直接寄送辨宠,因為細胞冷凍的過程中冰晶很容易刺破細胞,此時破碎的細胞會容易對RNA和RNA降解
b. 細胞樣品勿用胰酶消化捌养,胰酶會消化細胞膜上的膜蛋白湾蝙,導(dǎo)致細胞破裂,破裂的細胞會釋放核酸酶螃妨。
2.3 植物組織組織采集
①選取新鮮惰绘、幼嫩、生長旺盛的組織部位耐叽,植物組織越幼嫩越新鮮所含的次生代謝產(chǎn)物越少蟀蛆,隨著植物的逐漸成熟,所含的次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)量越來越多录抖,而次生代謝產(chǎn)物會影響RNA的抽提男沛。以草莓的花為例,這么個體量的花两候,4朵即可滞泣,其它花朵樣本一次類推。
②(部分樣本可選項)迅速用預(yù)冷的RNase-Free水配制的1×PBS或生理鹽水清洗組織表面的污漬媳阴,吸干表面的液體奋屠。用剪刀剪切成合適的大小(若非特殊情況窃爷,長度最好不要超過2cm)
③處理好的組織迅速放入預(yù)冷好的已寫好編號的RNase-Free的?耐-192℃低溫的螺紋凍存管中邑蒋,或用標(biāo)記好名稱的錫箔紙包裹好,?液氮速凍>1小時按厘,轉(zhuǎn)移到-80℃長期保存,在RNA提取前避免反復(fù)凍融医吊,干冰寄送樣本。若在離體后10min未用液氮速凍降溫逮京,極有可能引起樣本降解遮咖。不可直接將樣本放入-80℃保存,此時低活性的RNase仍能引起樣本降解
注意事項:
a. 植物組織不建議RNAlater保存造虏,因為植物組織含有細胞壁及次生壁御吞,RNAlater不易滲透入組織內(nèi)部;特別是表面有蠟質(zhì)的植物種植漓藕,勿用TriZol直接浸泡植物組織
b. 不允許將植物組織磨成粉寄送陶珠。
c. 表面含有較多蠟質(zhì)的植物樣本或次生代謝產(chǎn)物含量極高的植物組織或植物組織的莖和根及種子RNA得率通常會較低挟裂,為提高RNA的得率需要加大送樣量,為普通樣本送樣量的3-4倍揍诽。
2.4 全血/PBMC/血清/血漿以及其他體液樣本搜集
聯(lián)川生物推薦使用BD公司的PAXgene?采血管采集全血诀蓉,使用BD公司的真空采血管采集全血后分離血清,或使用EDTA紫色抗凝管搜集全血樣本以及分離后續(xù)的血漿樣本竖枚。不允許使用綠色的肝素采血管采集全血劝讯,因為肝素會影響PCR酶的逆轉(zhuǎn)錄效率。
a. PAXgene采血管采集全血方式:
①采血前路棍,應(yīng)將采血管恢復(fù)室溫持乌,推薦溫度為18-25℃(一般PAXgene采血管保存于室溫或4℃,最高不超過40℃)
②采血時攀叼,假如前面已經(jīng)使用了多種采血管采集血液時硫搏,應(yīng)該在最后使用PAXgene采血管;僅用PAXgene采血管時要嘿,先用另一個采血管采集1-2mL血樣涝调,丟棄該采血管,再使用PAXgene采血管或腔。這種作用是因為臭器,采血器容積能被預(yù)灌注,另減少血壓造成的沖擊力蔚便,一定程度上清洗采血管锡移,采血量:2.5ml,適用對象:人和靈長類動物漆际。
③采血后淆珊,立即上下顛倒混勻十次左右,18-25℃正立放置2h奸汇。④ 若不立即提取施符,將采血管正立置于塑料試管架上(注意:試管架與采血管之間需留有空隙,防止低溫保存過程中管壁開裂)擂找,先于-20℃放置24h,然后轉(zhuǎn)移至-80℃進行長期保存或轉(zhuǎn)移至干冰中進行運輸戳吝。注意,在這一步中需要把采血管中的全血樣本轉(zhuǎn)到螺紋口凍存管即可放入-80℃冰箱贯涎,無需再將凍存管在?液氮速凍1小時听哭。
⑤運輸時請使用厚壁泡沫盒,放入充足的干冰塘雳,在樣品保存及運輸過程中應(yīng)避免反復(fù)凍融陆盘。
b. EDTA采血管/真空采血管采集全血方式:
①樣本采集前,先用75%的酒精棉由內(nèi)向四周對采血部位進行消毒
②采血至特定的采血管中,數(shù)量達到負壓允許的最大值
③樣本采集完成后丰搞,立即輕柔顛倒混勻10次沉沾。動作盡可能平緩。加入三倍以上體積的TriZol(TriZol:血液≥3:1)裂解液混勻稚铡,此時出現(xiàn)沉淀為正常情況革辖。
④混勻完畢后,立刻轉(zhuǎn)入?耐-192℃低溫的螺紋口凍存管旺哀,轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存查袄,干冰運輸。注意采血至提取RNA最長時間不得超過一周恤朝。
c. 血漿中PBMC提取法:
①接著上一步EDTA抗凝管離心后分層那一步仓泣,將Ficoll和PBS從低溫恢復(fù)到室溫
②向50mL離心管(標(biāo)記A)中加入10mL Ficoll,隨后最好靜置一段時間似靖;向另一只50mL離心管(標(biāo)記B)加入10mL PBS
③稀釋:溫和搖勻抗凝采血管,用 kimwipes或者消毒紗布移除上蓋并放一邊败旋,將 10mL血液轉(zhuǎn)移至B離心管录切,溫和混合,獲得PBS混合液(20mL)
④適度傾斜離心管A仁连,將20mL PBS 混合液沿壁緩慢加入(注意要緩慢蓝角,過快會穿破Ficoll層,極大影響提取效果)
⑤梯度離心:小心地將離心管放入離心機(不要擾動液體層)饭冬,室溫400g 20min離心使鹅,加速/減速分別設(shè)置為1/0
⑥離心之后小心將其取出,放置于操作臺上昌抠,可見分為四層患朱,見上圖
⑦可選:先移除淋巴細胞層上2-3mm的血漿,方便后面吸取
⑧用P1000移液槍盡可能吸取PBMC炊苫,轉(zhuǎn)移至15mL離心管裁厅,盡量避免吸取血漿和Ficoll
⑨加入PBS 使體積變?yōu)?0mL,蓋上蓋并溫和翻轉(zhuǎn)搖勻5次
⑩室溫 300g 10min離心侨艾,加速/減速分別設(shè)置為9/9执虹。去上清并輕彈離心管末端,直至細胞團在剩余PBS中完全重懸
注意事項:重復(fù)步驟⑨-⑩唠梨,最后按照TriZol和體積約3:1的比例加入TriZol保證充分裂解袋励,裂解標(biāo)準(zhǔn)請參考上面貼壁細胞裂解液處理方式
d. 血清樣本(外泌體適用)
①建議使用進口醫(yī)用血清管或真空采血管等收集全血
②上下輕輕顛倒混勻十次后,立即將全血置于4°C或冰盒中正立放置
③1800g 10min離心分離得到上層血清樣本(全血需在1h內(nèi)進行血清分離当叭,依據(jù)血清管操作說明或客戶實驗室血清分離步驟進行操作)
④將血清轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中接碘,13000g離心2min;
⑤將上清轉(zhuǎn)移至規(guī)格在200μL-1.5mL耐-192℃超低溫螺紋口凍存管中室午,每份樣本至少≥100μL(0.1mL)揉远。?液氮速凍1h后-80℃保存斟迁,干冰運輸
e. 血漿樣本(外泌體適用)
①建議使用紫色EDTA抗凝管收集全血樣本
②上下輕輕顛倒混勻十次后,立即將全血置于4°C或冰盒中正立放置
③1200g 10min離心分離得到上層血漿樣本(全血需在1h內(nèi)進行血漿分離衰件,依據(jù)抗凝管操作說明或客戶實驗室血漿分離步驟進行操作)
④將血漿轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中邻因,13000 g離心2min
⑤將上清轉(zhuǎn)移至規(guī)格在200μL-1.5mL耐-192℃超低溫螺紋口凍存管中,每份樣本至少≥100μL(0.1mL)擅盏。?液氮速凍1h后-80℃保存耽暖,干冰運輸
注意事項:
a.分離血清血漿應(yīng)嚴(yán)格按照操作說明進行,操作需在1h內(nèi)完成纹硼,避免出現(xiàn)溶血現(xiàn)象英胖,血清血漿分離后避免反復(fù)凍融。
b. 血清血漿送樣量的原則:越多越好壶缚,如果客戶手頭上的血清血漿量較少皿港,則有多少就送多少,通常該種類型的樣本RNA含量較低溉奕,所以需要通過加大樣本量以富集足夠多的RNA褂傀,以保證后續(xù)實驗的順利進行,此外血清血漿RNA通常不質(zhì)檢
c.分離血清/血漿樣本的全血不可冷凍加勤,混入的血細胞的樣本盡量棄盡仙辟,已無法使用
d血清/血漿的RNA得率為2-8ng/mL
小貼士——
溶血現(xiàn)象解釋:即因紅細胞細胞膜的破裂而導(dǎo)致的紅細胞破碎、血紅蛋白溢出的現(xiàn)象鳄梅。溶血可由多種物理或化學(xué)因素引起叠国,尤其在人體外,滲透壓的變化戴尸、機械外力粟焊,溫度的變化,酸堿度的變化或血液處理的過程中人為添加的一些化學(xué)物質(zhì)孙蒙,均有可能引起不同程度的溶血
溶血應(yīng)對策略:(1)血液離開人體后吆玖,血液環(huán)境的穩(wěn)定性與保存時間的長短呈反比,細胞膜的穩(wěn)定性也在下降马篮,在這種情況下沾乘,應(yīng)盡快開展血清血漿的分離;(2)不同的抗凝劑有其不同的分子構(gòu)型诽泪,會對血液中各細胞的細胞膜產(chǎn)生不同的作用杰赴,有的會增加細胞膜的穩(wěn)定性,有的會降低細胞膜的穩(wěn)定性挂闺,所以選擇一款合適的抗凝劑至關(guān)重要(抗凝劑推薦:EDTA便金、檸檬酸鈉);(3)血液存放過程中溫度過高或反復(fù)凍融對細胞膜有很大的損害。溫度過高及反復(fù)凍融會使細胞膜上的結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)象發(fā)生改變断克,進而造成細胞膜的彈性降低以致破解產(chǎn)生溶血現(xiàn)象戈般,所以用于分離血清血漿的血液應(yīng)避免反復(fù)凍融
f. 細胞上清液、尿液抑琳、唾液候塞、羊水、腦脊液(外泌體相似)
①收集細胞上清液果嗜、新鮮尿液季键、唾液、羊水补颗、腦脊液(起始量按照前面表格中提示)可都,要確保不能溶血(血液中蛋白會污染樣品蛋白);置于4°C 或冰盒中正立放置蚓耽,轉(zhuǎn)移至RNase-free離心管渠牲。以下操作請在樣本收集后的1h內(nèi)進行,以防RNA降解
②在4°C條件下離心3000g約10 min步悠,去除細胞及碎片
③將上清小心傾倒入新的RNase-free離心管(注意不要轉(zhuǎn)移沉淀)签杈,在4°C條件下離心13000g約2 min,去除殘留的碎片及細胞
④轉(zhuǎn)移上清至全新的耐-192℃超低溫螺紋口凍存管中贤徒,?液氮速凍1h(可選)芹壕,嚴(yán)密封口汇四。-80°C保存接奈,干冰運輸
注意事項:細胞上清液碎片過多,需要充分低速離心多次去除碎片通孽。收集尿液的前一天飲食要清淡序宦,晨起中段尿(臨床),晨間1h的尿液(動物)背苦。唾液搜集之前需要禁食禁煙禁酒2h以上互捌,上午9:30-11:30取樣,蒸餾水漱口腋钞,將唾液吐于無菌的痰杯(保持水砸鹫础),不要咳痰肺倾,采集唾液時間為30min左右负腻,4℃ 10000rpm 10min,取上清圈咬,經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌淡窘。
2.5 石蠟組織
手術(shù)/活檢組織石蠟塊
RNA單次提取需35mg以上的量。從醫(yī)院病理科切取手術(shù)組織總量≥35mg(綠豆大小,不可取暴露于空氣中的組織截面部分)讼牢,活檢組織長度>1cm板拂,需2-3條,蠟塊完整盾摹,無磕碰損傷的石蠟包埋組織嬉竞。未切片的石蠟塊4℃或常溫運輸即可
手術(shù)/活檢組織石蠟卷片/活檢組織石蠟切片
RNA提取一次提取<80μm。從醫(yī)院病理科切取組織厚度約為10-20μm的石蠟卷片撕贞,手術(shù)組織10張(組織>1×1cm2)更耻,或20張(組織<1×1cm2),穿刺組織20-25張捏膨。將切好的卷片放置于耐-192℃超低溫螺紋口凍存管秧均,迅速浸入液氮速凍>1h, -80℃保存或者干冰運輸。
注意事項:
a. 送樣優(yōu)先順序:?石蠟塊>石蠟卷>石蠟切片
b. 所有石蠟組織樣本需盡量送檢一年以內(nèi)的樣本号涯,?不得超過18個月目胡,建議提供一張免疫組化或組化染色切片
c. 新制切片常溫放置應(yīng)在1周以內(nèi),2-8℃放置應(yīng)在1個月以內(nèi)链快,-20℃貯存應(yīng)在6個月以內(nèi)
d. 強烈建議每個貼片盒中只存放一個患者的樣本誉己;若需與其他患者樣本放在一起,必須做間隔區(qū)分域蜗,防止樣本接觸造成污染
e. 強烈不建議使用添加瓦楞紙或自折Z形紙擺放石蠟切片巨双,因運輸過程中的碰撞會導(dǎo)致石蠟切片擠到一起,造成切片破損或樣本污染霉祸。
石蠟組織容器
石蠟切片示例
2.6?非致病性細菌樣本采集
一次反應(yīng)所需細菌的量≤1×107個
①顯微鏡下觀察生長狀態(tài)筑累,收集對數(shù)生長期細菌;
②將適量體積的菌液轉(zhuǎn)移至2mL旋蓋尖底RNase-Free離心管中丝蹭,室溫或4℃下14000g離心4-10min
③棄盡培養(yǎng)基疗刮,將細菌沉淀迅速置于?液氮速凍>1h,然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中長期保存蝌购,干冰運輸
2.7?非致病性真菌樣本采集
一次反應(yīng)所需真菌的量≤50mg忿迷,將真菌稱重,分裝多管铅阎;將稱重后的真菌置于預(yù)冷的耐-192℃超低溫螺紋凍存管中纫惰,迅速投入液氮,速凍時間>1h歌饺,轉(zhuǎn)入-80°C長期保存或用干冰直接寄出瓢疤。
2.8 致病性真菌細菌處理方法
所有可能致病的真菌、細菌RNA項目樣品厦螟,均需要按下面步驟預(yù)處理以后才能寄送至公司官溜,且需要提前通知實驗室怎开,明確菌種。溶液A牵字,B可以向?qū)嶒炇宜饕簟嶒炇覍ξ唇?jīng)處理的可能致病的樣品,進行銷毀處理
①細菌/真菌沉淀(不超過30mg岸夯,約綠豆大新橄住)加入400ul溶液A,吹打重懸菌體猜扮。
②在重懸的菌體中加入400ul溶液B勉吻,劇烈震蕩混勻。
③65℃水浴或金屬浴加熱30min旅赢,每隔5min劇烈震蕩一次齿桃,防止分層。
④處理結(jié)束以后煮盼,-80℃凍存短纵,干冰運輸。如為致病菌僵控,請用70%乙醇處理容器表面(注意如處理過程中編號模糊香到,處理后重新寫好編號),確保安全报破。
注意事項:
(1)室溫較低時溶液A可能析出沉淀悠就,可65℃預(yù)熱2-3min待沉淀溶解后混勻使用。
(2) 溶液B有腐蝕性烘梭,使用注意安全操作阴应。溶液B為有機溶液,上層液體為水封衡蟹,吸取時確保將槍頭插入下層液體已清。
(3) 溶液A态晤,B不互溶镇弄,操作時需要震蕩充分,使兩種液體形成乳濁液喧盲。
(4) 樣品提交單上請注明:樣品經(jīng)過溶液A纽肄,溶液B預(yù)處理。
2.9?Total RNA樣品
Total RNA一般長期保存于-80℃冰箱鄙幸,若要寄送可直接使用干冰寄出夹村,或加入適量保存液,再用干冰運輸邦墅。
RNA的保存介質(zhì)(建議濃度>50ng/μL):
①RNA保存液(1/10體積3M NaAc袒兵,pH=5.2毙驯,3倍體積無水乙醇)
②3倍體積無水乙醇
③RNase-free水(送樣量>15μL)
注意事項:
(1) total RNA中應(yīng)盡量避免多糖、蛋白灾测、DNA等雜質(zhì)的殘留爆价,送樣時需注明溶劑成分
(2) total RNA應(yīng)避免反復(fù)凍融,由于反復(fù)凍融所產(chǎn)生的剪切力會對RNA樣品有破壞作用媳搪,所以在實際操作中铭段,應(yīng)對RNA樣品小量分裝
輔助材料
1. 樣本包裝注意事項
①在包裹樣本的鋁箔或冷凍保存管表面,用油性記號筆標(biāo)明樣本編號及樣本類型秦爆。并且不要與乙醇等有機溶劑接觸
②不要用紗布序愚、紙張直接包裹樣本,而是用鋁箔或冷凍保存管包裹后再裝入樣本袋中
③不要用玻璃容器在液氮中保存樣本等限;
④不要把標(biāo)簽紙或其他紙制的說明性文件放入樣本袋內(nèi)爸吮,因為紙張在液氮中是易碎的
⑤標(biāo)簽紙應(yīng)該貼于樣本袋繩上,不要貼于容器表面以免脫落造成樣本混亂
⑥ 不要在一只樣本袋中放過多的樣本望门,以防無法放入液氮罐或無法從液氮罐中取出拗胜。樣本袋在使用前先在液氮中預(yù)冷
⑦ 客戶在填寫《樣本登記單》時應(yīng)當(dāng)詳細描述(臨床樣本則最好也注明臨床病因及所處階段)樣本的類型、處理方法怒允、儲存條件以及儲存時間等相關(guān)細節(jié)埂软,以便技術(shù)人員確定合理的實驗方案
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樣本儲存注意事項
① 液氮速凍完畢后,攜帶樣本的凍存管或錫箔紙等應(yīng)該立即放入-80℃保存思袋。常規(guī)樣本在10min內(nèi)必須立刻使用液氮速凍聪供,不可直接將樣本在未經(jīng)液氮速凍處理后直接放入-80℃保存。未經(jīng)液氮淬滅的樣本中還會殘留低活性的酶估骡,從而引起核酸降解以及蛋白變性
② 組織樣本采集后蜒且,樣本迅速放入進口高質(zhì)量凍存管中,凍存管推薦使用進口的并且耐低溫-192℃的螺紋口凍存管暮霍,擰緊后立即放入液氮尤喂。然后再轉(zhuǎn)移到-80℃中保存。如果因為沒有擰緊會導(dǎo)致液氮流入凍存管串篓,空氣熱脹冷縮后發(fā)生爆炸
③ 組織樣本儲存于液氮或-80℃冰箱中辽奥。對于液氮保存樣本,務(wù)必注意绩寂,不要用非螺口離心管和國產(chǎn)凍存管茶括,因為這些管子從液氮中取出時極易發(fā)生管子爆裂而造成樣本損失。建議使用第②條提到的凍存管佃戈。實在條件缺乏必須使用封口膜將離心管充分封鎖防止爆炸(不推薦這樣操作)
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樣本運輸注意事項
① 飛機運輸干冰上限約為20公斤诅福,超過20公斤原則上不能運輸⊥闲穑火車運輸不受限制氓润。
② 干冰運輸應(yīng)采用壁厚且質(zhì)量完好的泡沫箱赂乐,材料用編號后的凍存管存放,用塑料袋包裝后埋入干冰中咖气,泡沫箱應(yīng)扣嚴(yán)并用封箱帶封嚴(yán)沪猴。外套紙殼箱包裝,以免碰裂采章。并標(biāo)明輕取輕放提示运嗜,以保證安全運輸
③ 干冰運輸可委托當(dāng)?shù)乜爝f公司,盡量確保48小時內(nèi)送達公司悯舟,不能送貨上門的應(yīng)提前通知公司相應(yīng)人員担租。
④ 24小時到達的,干冰總量不得低于5公斤抵怎;48小時到達的奋救,干冰總量不得低于8公斤。夏季可以適當(dāng)再多增加部分干冰(平時的1.5倍)反惕。不要使用大塊狀干冰或完全呈粉末狀的干冰赶马,而是需要小的圓柱體干冰,否則運輸過程中自重比較大的塊狀干冰可能會在箱內(nèi)擠壓樣品盒马怎,移動中可能造成樣品盒破裂既屋。如果只有大塊狀干冰可以使用,那么裝箱時先砸碎成小塊
⑤ 包裝時建議用大塑料袋包裹干冰并在箱中放冰袋惰渐,可有效減緩干冰揮發(fā)速度闰幽。選擇合適大小,且箱壁較厚的泡沫箱校社,并在泡沫箱外縱橫方向都纏上透明膠屯贺,最好是將泡沫箱外壁用膠帶覆蓋一遍,帶防止運輸途中因擠壓和拋擲而破裂欠怕。泡沫箱全部纏上膠帶后摸进,為防止密封過緊,氣密性過強潘所,干冰揮發(fā)產(chǎn)生過大壓力而造成泡沫箱爆裂挽晌,用美工刀或其他薄刃刀具,將纏在泡沫盒蓋和箱體接合處的膠帶刺破一個1-2厘米的小縫隙援雇,以在氣壓過高時排出氣體
⑥ 如委托快遞運輸矛渴,運輸過程中應(yīng)隨時跟蹤貨物的情況椎扬,記錄貨單號惫搏,并保持與發(fā)出地和接收地的快遞公司的聯(lián)系
5
注意事項
① 客戶如果提供凍存可復(fù)蘇的細胞株,應(yīng)首先驗證所用凍存方法用于RNA提取的可靠性蚕涤,并且在送樣時提供詳盡的復(fù)蘇方法筐赔,以便確保實驗成功
② 所有樣本均應(yīng)標(biāo)明準(zhǔn)確的樣本編號铣猩,同時配有一張樣本登記表,寫明樣本名稱茴丰、物種达皿、編號、取樣日期贿肩、樣本處理情況等峦椰。
③ 提取RNA質(zhì)與量:a. 處于不同發(fā)育階段以及不同生長條件的樣本中所含有的RNA、RNA以及蛋白的量是不同的汰规,在某些實驗條件下或某些病變部位獲得的樣本中核酸的量可能與常規(guī)相應(yīng)樣本有顯著的差異汤功;b. 儲存條件以及儲存時間也是影響RNA質(zhì)與量的關(guān)鍵因素。一般來說從新鮮的樣本中總是能夠得到預(yù)期的核酸量鲁其,并且含量相對較高吟芜,更容易檢測。但是沒有保存在液氮或-80℃冰箱中的樣本是不可靠的耐浙,因此夯榛,強烈建議盡可能低溫保存。
④ 關(guān)于備份慢荧,為確保實驗的順利杯岩,我們強烈建議您在取樣時,應(yīng)同時備份2-3份松奖,如備份3份访芙,則送給我們兩份,如果備份 2份计员,則送樣一份薯替,您自己留一份,以防備部分樣本降解假仙,重新取材或送樣耽誤您的時間救辖。即使樣本全部合格,備份的樣本您還可以用來進行其他方面的實驗(如定量驗證氮唯,蛋白方面鉴吹,生化方面的實驗等)。備份又分為兩種惩琉,一種為嚴(yán)格備份豆励,即樣本取下后一分為二,這樣的兩份樣本基本上具備同性質(zhì)瞒渠。另一種為非嚴(yán)格備份良蒸,即生物學(xué)重復(fù)的樣本,這樣的備份樣本同質(zhì)性要較前者差伍玖。
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樣本寄送指南
① 將收集好的樣本置于相應(yīng)的收集管中嫩痰,為防止樣本混淆管蓋和管壁均要書寫編號剿吻,并用封口膜封口;
② 將樣本放入自封袋中串纺,在樣本提交單上填好樣本詳細信息(編號等信息必須嚴(yán)格與樣本管上一致)丽旅,將填好的樣本單和樣本一起放入泡沫箱中;
③ 選用大小合適纺棺、箱壁大于4 cm且密封性良好的泡沫箱榄笙,并在泡沫箱外縱橫方向都纏上透明膠,防止泡沫箱在運輸過程中的開裂助苫。
④ 樣本寄送步驟:
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關(guān)注微信公眾號