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技術(shù)專欄

ELISA實驗中標(biāo)曲怎么做?
供稿:市場部發(fā)布時間:2024-01-19瀏覽量:1824次
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曲線繪制的使用工具

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以下所述中使用的曲線繪制軟件為Curve E xpert1.4, 各位老師們?nèi)缬行枰纯?span style="font-family:微軟雅黑;">點擊此鏈接下載自行下載使用烈菌;

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標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
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可以采用各種繪圖軟件來繪制 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線忙干,下面以“Curve Expert1.4”軟件為例枕详,繪制 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法如下;

1.啟動“Curve Expert”

2.X 軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值(雙抗夾心輸入 OD-空白值)鳍怨,Y 軸輸入所對應(yīng)的濃度值,如圖:

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3.單擊[運(yùn)行]按鈕,出現(xiàn)如下對話框

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4.單擊[ok]按鈕客扎,出現(xiàn)如下兩個對話框,關(guān)閉下面一個對話框

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5. 在對話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱罚斗,從“1”開始依次點擊曲線名稱徙鱼,在右下角會出現(xiàn)相應(yīng)擬合的曲線。(一般選擇第一個多項式擬合)

6. 根據(jù)擬合的曲線選取 ELISA 擬合度最佳的曲線雙擊针姿,出現(xiàn)如下對話框:注意:選擇系數(shù)(即“r”值)最好的曲線方程來進(jìn)行運(yùn)算袱吆。

在下面的對話框 右上角有“r”值,當(dāng)“r”值越接近 1 擬合度越好

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7.按[Ctrl]鍵+[L]鍵距淫,出現(xiàn)如下對話框:

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8.輸入標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值绞绒,單擊[Calculate]按忸,即可得到待測蛋白的實際含量(標(biāo)本稀釋了 N 倍榕暇,運(yùn)算出的數(shù)值應(yīng)在乘以 N)蓬衡。?

9. 如想得到 ELISA 擬合曲線的方程,可在步驟 6 的對話框空白處右擊彤枢,選擇”Information”

10. 得到如下對話框:點擊“Copy”

在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù):

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)?

Coefficient Data:?

a = -21.531017?

b = 212.05019?

c = -0.24054479 d = 0.018060778?

11. 修改作圖中 X,Y 坐標(biāo)軸高度以及相關(guān)屬性 選擇步驟 9 所示圖中的第二排“Graph Properties”狰晚,修改好后點擊 OK 保存

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做標(biāo)準(zhǔn)曲線時有幾個問題需要注意

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注意事項一

1、樣品的濃度是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的须彼,所以要嚴(yán)格按照說明書指示進(jìn)行操作乒萝,標(biāo)準(zhǔn)曲線能直接反映操作是否準(zhǔn)確。

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注意事項二

2煮啡、樣品濃度較高時隘匙,應(yīng)當(dāng)稀釋樣本再進(jìn)行檢測,樣品OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)才能得到更準(zhǔn)確的計算結(jié)果馁祈。

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注意事項三

3恕臣、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點(除去零孔/背景孔)委董,但至少要保證有5個點,當(dāng)標(biāo)曲有個別孔讀數(shù)值不正常時靴亩,可以摳除血明。

注意事項四

4、夾心法的標(biāo)曲制作和樣本濃度計算時需要減掉0孔背景值伪睬,競爭法不需要腊尤。

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注意事項五

5、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎涌诶#话銇碚f揩页,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.99,R值越接近1烹俗,說明標(biāo)曲擬合越好爆侣。

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