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技術(shù)專欄

ELK Biotechnology總結(jié)實(shí)驗(yàn)大鼠峡迷、小鼠常用的采血方法
供稿:技術(shù)部發(fā)布時(shí)間:2022-09-20瀏覽量:7248次

常見小鼠采血方法

小鼠是科研實(shí)驗(yàn)中常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,但由于其體積小,血管細(xì),采血難度大,進(jìn)而影響采血的質(zhì)量射屿。

ELK簡(jiǎn)要總結(jié)了常見的小鼠采血方法,僅供參考:

一只成年小鼠的循環(huán)血量大約是1.5~2.5ml,大約體重的 6~8%娄帖。在對(duì)營(yíng)養(yǎng)狀況良好的小鼠進(jìn)行采血時(shí),單次采血量最多可以到達(dá)循環(huán)血量的10%卜判,(例:若20克小鼠仔省,它的總血量約占1.2-1.4毫升,即每次取120ul-140ul血液不會(huì)對(duì)小鼠有太大的影響)众攻。采血之后應(yīng)該給予溫?zé)岬牡葷B溶液補(bǔ)充红集,可以在2~3個(gè)星期內(nèi)恢復(fù)原有的水平。兩周采血量小于血液循環(huán)的10%条稍,單周小于7.5%判懒,小鼠血液循環(huán)72ml/kg

實(shí)驗(yàn)室常用抗凝劑:乙二胺四乙酸(EDTA)鹽、枸櫞酸鹽悟惰、草酸鹽刀雳、肝素

實(shí)驗(yàn)室常用采血管:(采血后立即顛倒混勻8次)

1.黑色:枸櫞酸鈉;血沉

 

2.淺藍(lán)色:枸櫞酸鈉估曾;血凝試驗(yàn)(如PT粪世、APTT)

3.深藍(lán)色:肝素鈉或EDTA-Na2馆义;血液微量元素

4.紫色:EDTA-K2;血常規(guī)(血液細(xì)胞分析)

5.綠色:肝素鋰胁塞;大部分生化咏尝、血氨

6.灰色:血糖降解抑制劑和EDTA-Na2;血糖

7.棕色:肝素鈉或EDTA-K2啸罢;血鉛

 

8.淺黃色ACD管:葡萄糖编检、抗凝劑;血庫(kù)試驗(yàn)

9.淺黃色SPS管:SPS液扰才、氯化鈉溶液允懂;血液培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)

尾尖采血

 

麻醉小鼠后衩匣,用溫水(但水溫不要過高)擦拭尾巴累驮,引起輕微的血管擴(kuò)張。

用無菌手術(shù)刀舵揭、刀片或鋒利的剪刀谤专,快速截?cái)嘈∈笪布?.5-1cm。如果需要多次采血午绳,之后每次僅需截除2-3mm置侍。

可以從尾部向尾尖方向按摩,以增加血流(但是拦焚,這會(huì)降低血樣的質(zhì)量瘫骏,增加溶血的風(fēng)險(xiǎn))。也可以用毛細(xì)采血管收集血液荣吻,或直接滴入收集管中哭夺。采血結(jié)束后,按壓傷口或使用止血?jiǎng)ㄈ缦跛徙y押辽,6%液體火棉膠)來止血卷撞。每次采血量大約可達(dá)0.1ml。

 

眼眶靜脈叢采血

 

優(yōu)點(diǎn):眼眶后靜脈叢采血法方法簡(jiǎn)單饵忙,便于掌握盐文。血流較快,采血量多岖疲,能在較短時(shí)間內(nèi)采約0.5mL血咏摔。傷口較小,愈合較快极阴。成功率高昙百,死亡率低。

缺點(diǎn):不能避免組織液的混入碟狞,對(duì)于血樣要求較高的研究應(yīng)謹(jǐn)慎使用啄枕。

小鼠經(jīng)氣體麻醉后婚陪,左手拇指及食指壓迫小鼠的頸部?jī)蓚?cè),阻礙靜脈回流射亏,使眼球充分外突近忙,提示眼眶后靜脈叢充血竭业。也可以將小鼠放置在側(cè)臥位智润,拇指與食指分別置于小鼠頭頂和下頜,將皮膚向后及向下拉未辆。抓握時(shí)要避免對(duì)氣管施壓窟绷,否則可能會(huì)影響小鼠呼吸。

將毛細(xì)采血管(建議采用0.5*100mm規(guī)格的毛細(xì)管咐柜,在使用前折成小段兼蜈,每段大約3-4cm)置于內(nèi)側(cè)眼角處,并且以與鼻翼平面成30-45度沿內(nèi)眥插入內(nèi)眼角拙友,滑入眼球后方为狸,輕輕向眼底方向刺入。

當(dāng)感到有阻力時(shí)即輕輕旋轉(zhuǎn)采血管的同時(shí)施加壓力以切開靜脈叢遗契,血液將通過毛細(xì)作用流入采血管臭膊。不能刺地過深,一般2-3mm即可膊编。

采血結(jié)束后栏赋,立即松開手指對(duì)小鼠的壓迫,使眼球復(fù)位尸钢,同時(shí)將采血器拔出仙衩。可用干棉球壓住眼眶熔厌,確保止血篇挡。一般眼眶靜脈叢采血量可以達(dá)到0.2-0.3ml。

 

 

頜下靜脈采血

 

綁定小鼠誉煎,可將小鼠側(cè)臥姥胳,使小鼠頭部盡量固定。在小鼠嘴角沿線與外眼角線橡膠處找到頜下靜脈的大致位置好啸,會(huì)發(fā)現(xiàn)一個(gè)無毛的小點(diǎn)贵健,有點(diǎn)像酒窩,基本位于嘴角遠(yuǎn)端稍低于下巴線渊季。

針保持垂直于皮膚表面朋蔫,刺入皮膚。深度不超過針頭的斜面(約3mm)却汉。拔出針頭后驯妄,血液就會(huì)流出荷并。為方便采血,可使小鼠頭部低于心臟高度青扔。采血結(jié)束后源织,按壓以止血。一般采血量為0.2-0.5ml微猖。

 

隱靜脈采血(總量5%)

 

將小鼠置于固定管或架中谈息,但保持后腿可自由活動(dòng),剃除跗部的毛凛剥。為使膝蓋與踝關(guān)節(jié)之間的隱靜脈更加明顯侠仇,可以在后腿膝蓋以上使用止血帶。在近尾側(cè)的皮膚表面可以找到隱靜脈犁珠。

針垂直于皮膚表面扎破血管逻炊。不要進(jìn)針過深,以免刺穿肌肉或碰到骨頭雇牍。血液會(huì)從入針處慢慢流出嗅呻,用毛細(xì)采血管收集,并松開止血帶乌心。采血結(jié)束后导劝,按壓傷口或使用止血?jiǎng)ㄈ缦跛徙y)以止血,并將小鼠放回籠內(nèi)枕泽。

 

 

舌下靜脈采血

 

將小鼠麻醉后仰臥于實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上并固定往姆。用眼科彎鑷將小鼠舌頭拉出,可明顯看到小鼠舌下靜脈掰站。

持采血針與舌面呈10°夾角插入舌下靜脈宏湾,見有回血緩慢抽取,直至采到所需血量涧谓。

 

頸靜脈采血

 

該方法采血量( 0.2 ml至近全血量) 及采血次數(shù)( 1~8次/d) 可隨分析目的而變動(dòng),適用于人手少旋稚、動(dòng)物數(shù)量多、實(shí)驗(yàn)時(shí)間緊以及藥代動(dòng)力學(xué)等需連續(xù)少量取血的研究中瑟捺。但要求技術(shù)熟練, 方能得心應(yīng)手奕枝。在一定時(shí)間內(nèi), 如果采血量和采血次數(shù)增加, 會(huì)使動(dòng)物引起一定的應(yīng)激性反應(yīng)或采血部位的傷害。

將動(dòng)物胸前區(qū)采血部位皮膚消毒, 于胸前正中線約第四肋骨水平先用注射器針頭沿水平方向刺入皮膚瓶堕。

再向頸靜脈所在位置沿皮下進(jìn)針, 針頭到達(dá)頸靜脈所在位置時(shí), 輕引注射器內(nèi)筒使之呈負(fù)壓, 再使注射器與胸部表面成30°~ 40°角向頸靜脈刺入, 此時(shí)注射器應(yīng)與頸靜脈走行方向相一致隘道。

在刺入過程中, 速度要緩慢, 刺入的深度約5 mm, 在試探性緩慢刺入或拔出時(shí), 如有血液自動(dòng)流入注射器內(nèi)筒, 說明針尖已在頸靜脈內(nèi), 此時(shí)固定好動(dòng)物, 勿使注射器針頭移動(dòng)。

也可將采血針抵在動(dòng)物胸骨上以便于操作, 小心抽引注射器內(nèi)筒, 待血液足夠時(shí), 拔出采血針, 用干棉球按壓止血郎笆。

 

尾靜脈采血

 

一個(gè)人可以用微型手電筒或LED小夜燈等緊貼尾靜脈谭梗,在燈光的照射下,尾靜脈會(huì)被很清晰的顯示宛蚓,提高成功率激捏。

固定器(自行設(shè)計(jì))小鼠设塔,將尾巴拉直,用酒精棉球擦拭尾巴或者用熱水或者熱毛巾焐熱尾巴(熱水浸泡鼠尾), 使尾部靜脈擴(kuò)張远舅。

用左邊手的食指闰蛔,中指,無名指及大拇指將小鼠尾巴固定图柏。

握住1ml 注射器(選用29G的針頭為宜)前面0.1ml處序六,右手小指搭在拽著鼠尾的左手拇指處斜15°角緩慢進(jìn)針(鼠尾遠(yuǎn)端約1/3的位置)。適當(dāng)增加內(nèi)壓看有無回血爆办,若有回血?jiǎng)t緩慢抽取所需血量揩臊,棉簽按壓止血嚎脖。

 

 

頜下靜脈采血

 

將小鼠麻醉后鬼痹,平躺放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上,中指勤鼓、食指固定小鼠尾部榕吨。

用刀片輕劃小鼠尾側(cè)靜脈或尾正中動(dòng)脈。待血液流出后涎舔,用移液槍吸取血液甲盘。取血完畢后,棉簽按壓止血哮互。

 

 

腹主動(dòng)脈采血

 

優(yōu)點(diǎn):采血法取血量大臣镜、不易溶血,血液質(zhì)量較好题晌,適用于多項(xiàng)目檢測(cè)洁馒,且不損傷器官,有利于病理組織學(xué)檢查儡皮。

缺點(diǎn):操作比較復(fù)雜柱锹,應(yīng)注意掌握適當(dāng)?shù)穆樽砩疃龋乐剐奶E停丰包,同時(shí)防止大鼠躁動(dòng)禁熏。本方法造成的出血速度快,易造成出血性的心臟停跳邑彪,故要防止采血過程中出血瞧毙。且本方法采血過程中如多次采血不宜拔出針頭。

將大鼠腹腔注射麻醉劑后寄症,直到身體全身變軟宙彪,把大鼠仰臥固定在手術(shù)臺(tái)上,背部可以放置—粗試管以充分暴露腹主動(dòng)脈瘸爽。

常規(guī)消毒后用手術(shù)剪刀沿腹正中線剪開腹腔您访,用小鑷子輕輕扒開血管周圍脂肪铅忿,再用棉球把覆蓋在血管的多余脂肪擦干凈,直到清晰看清血管為止(用棉球可以盡量減少小血管破裂出血灵汪,影響接下來進(jìn)針時(shí)的視線)檀训。

找腹主動(dòng)脈(粉)在脊柱上面,腹腔靜脈血管(比腹主動(dòng)脈粗姆赔,黑)旁阅窝,找到后,術(shù)者先固定血管豆凛,盡可避免血管移位坞龙,左手拇指和食指固定住血管兩旁的脂肪及其它臟器,無名指按住血管進(jìn)針點(diǎn)的上端缸舱,降低血壓蚀稻,可以避免血液濺出。

右手持穿刺針把意,針尖斜面朝下府塘,入針角度約(小于)30度左右,朝向心端方向刺入绿捶,深度以5m左右為宜棚疏,進(jìn)針后可以用止血夾夾住針頭,可以避免麻醉不夠掙扎導(dǎo)致血管被針頭戳破婆精。

取完血后继溯,用棉球輕壓針眼處,快速拔出針頭沈条,可以反復(fù)采集多管的血樣進(jìn)行不同項(xiàng)目的測(cè)試(一般體重200~300g大鼠可采血液8~10mL)需忿。

 

心臟采血(非必需勿用)

 

優(yōu)點(diǎn):取血快,血液不易凝集拍鲤,心區(qū)面積大,進(jìn)針準(zhǔn)確性較高,可一針見血,且采血量能滿足大量試驗(yàn)需要贴谎。

缺點(diǎn):采血成功率較小,死亡率高季稳,心臟損傷較大擅这,難以迅速愈合,不利于短期連續(xù)采血景鼠,亦無法確定是靜脈血還是動(dòng)脈血仲翎。

一般有3種心臟采血的姿勢(shì):1、托起小鼠軀干使身體垂直與地面铛漓。身體直立以防止心臟的偏轉(zhuǎn)或胸部的扭曲溯香。使用1毫升注射器和22g針頭。將針頭從胸部中央向下5mm處插入,深度5-10mm玫坛,將注射器與胸部保持25-30度结笨;2、使小鼠仰臥固定傅慈,剪去胸前區(qū)被毛蹦虏,皮膚消毒后,用左手食指在左側(cè)第3~4肋間觸摸到心搏處碘淘,右手持帶有4~5號(hào)針頭的注射器刮血,選擇心搏最強(qiáng)處穿刺;3惰采、使小鼠側(cè)臥颂鞭,垂直于胸壁插入針頭。

如果血液沒有立刻進(jìn)入注射器栋锣,可以輕輕抽空針管刑袒,產(chǎn)生一個(gè)真空區(qū)。

當(dāng)注射器中出現(xiàn)血液時(shí)逃窜,將針管保持靜止并輕輕地抽拉活塞芯桿郊舅,以獲得更多的血液妒槐。一般可以采到0.8-1.0ml血液止骨。

 

摘除眼球采血

用左手拇指、食指和中指抓取小鼠的頸部頭皮吮铭,小指和無名指固定尾巴时迫,輕壓需要摘取的眼部皮膚,使眼球充血突出谓晌。

用眼科剪剪去小鼠的胡須掠拳,防止血從胡須處順流而下引起溶血。

用眼科彎鑷夾取眼球并快速摘取纸肉,并使血液從眼眶內(nèi)流入0.5mlEP管中溺欧。待小鼠取血完畢后,斷頸處死柏肪。

 

 

斷頭采血

用左手拇指和食指以背部較緊的捏住小鼠頸部皮膚姐刁,并作小鼠頭部朝下的姿勢(shì)。

右手用剪刀猛剪鼠頸烦味,約1/2-4/5的頸部剪斷聂使,讓血滴入容器中。

 

 

全血谬俄、血漿柏靶、血清的區(qū)別

全血包括血細(xì)胞和血漿的所有成分。采集全血時(shí),收集管中必須含有抗凝劑铛田。常用的抗凝劑有:肝素挂蹦、檸檬酸鈉和乙二胺乙酸酸 (EDTA)。根據(jù)不同研究需要進(jìn)行選擇嚣历。

血漿是全血經(jīng)抗凝處理后盔连,通過離心沉淀,獲得的不含細(xì)胞成分的液體阻羞。含有纖維蛋白原凰染、凝血因子等。

血清是全血未經(jīng)過抗凝處理忘拧,血凝塊聚縮釋出的液體捏诫。其中沒有纖維蛋白原和凝血因子。

分離血漿和血清的一般方法是:2200-2500rpm 離心至少15分鐘溃擒。

正常的血清或者血漿樣本為黃色清液连定,而若為偏紅,即為有紅細(xì)胞破裂而產(chǎn)生溶血現(xiàn)象叮洋。避免溶血應(yīng)注意以下的事項(xiàng):

1.采血時(shí)要避免小鼠毛發(fā)磁携、油脂沾染血液導(dǎo)致溶血,所用的容器良风、注射器必須清潔干燥谊迄,不能有水或者有機(jī)溶劑。

2.抽血時(shí)速度不要太快烟央,速度太快會(huì)有氣泡產(chǎn)生统诺。如果使用止血帶時(shí),止血帶不要扎的太久疑俭。

3. 抽出的血放入試管時(shí)粮呢,要先拔掉針頭再放血,同時(shí)速度不要太快钞艇。

4. 收集分離血清的全血時(shí)應(yīng)盡量使血液直接進(jìn)入小管底部啄寡,避免管壁或管蓋上的血液在離心過程中導(dǎo)致溶血

 

樣本出現(xiàn)溶血還可以用ELISA方法檢測(cè)嗎?

血樣采集操作失誤哩照、強(qiáng)力震蕩和多次凍融都有可能引起溶血發(fā)生挺物。

在ELISA檢測(cè)中,若樣本溶血輕微(淺紅色)葡秒,仍可做ELISA檢測(cè)躲窜,建議適當(dāng)增加洗板次數(shù),減少背景過高影響捺膳;若溶血嚴(yán)重(深紅色)咧笔,建議重新取樣鉴膝。

樣本溶血可能會(huì)引起ELISA檢測(cè)OD值升高、結(jié)果假陽(yáng)性垂票。

原因可能是樣本中游離的血紅蛋白非特異性吸附在酶標(biāo)板上李晾,血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有類似過氧化物酶的活性,其作用類似于辣根過氧化物酶育需,進(jìn)而催化底物的反應(yīng)以增加樣品的OD值并引起假陽(yáng)性恕且。

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