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貼壁細胞總蛋白提扰撩蕖：

用TBS緩沖液潤洗貼壁細胞2-3次席爽，最后一次盡量吸干殘留液答海。加入適當(dāng)體積的細胞總蛋白提取試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)于培養(yǎng)板/瓶內(nèi)裂解3-5min接箫。期間反復(fù)晃動培養(yǎng)板/瓶窃征，使試劑與細胞充分接觸。用細胞刮刀將細胞及試劑刮下肛精，收集到1.5mL離心管中狐怯。冰浴30min，期間用移液器反復(fù)吹打环自，確保細胞完全裂解改佛。4℃13000g離心5min，收集上清辰襟，即為總蛋白溶液遵奇。

懸浮細胞總蛋白提取：

低速離心收集細胞赏赔，加入適當(dāng)體積的冷卻的PBS緩沖液重懸杏恍，2000rpm離心10min，吸除上清雷倦。重復(fù)以上操作兩次贩纵，收集細胞沉淀。加入適當(dāng)體積的細胞總蛋白提取試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)都晶，振蕩懒叛。冰浴30min丸冕，期間用移液器反復(fù)吹打，確保細胞完全裂解薛窥。4℃13000g離心5min胖烛，收集上清，即為總蛋白溶液诅迷。

組織總蛋白提扰宸：

組織塊用預(yù)冷的PBS緩沖液漂洗2-3次，去除血污罢杉，剪成小塊置于勻漿器中趟畏。加入10倍于組織體積的組織蛋白提取試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)，冰浴徹底勻漿滩租。將勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管中赋秀，振蕩。冰浴30min律想，期間用移液器反復(fù)吹打猎莲，確保勻漿液完全裂解。4℃13000g離心5min霸碰，收集上清石阵，即為總蛋白溶液。

胞漿胞核蛋白提认幻琛：

收集細胞豌楷，將細胞重懸于適當(dāng)體積的漿蛋白提取試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)中，振蕩混勻15 秒桶眠，使細胞完全懸浮并分散開橘疚。如果細胞沉淀沒有完全懸浮并分散開，可以適當(dāng)延長振蕩混勻時間盹扮。冰浴30 min胶僵。高速振蕩混勻5 秒，4℃13000g 離心10 min字拒。吸取上清至一預(yù)冷的離心管中隘勾，即為細胞漿蛋白。吸盡上清(上清盡量去凈投嫂，避免漿蛋白污染)捏章，加入適當(dāng)體積的核蛋白提取試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)，高速振蕩混勻15 秒川梅，使沉淀完全懸浮并分散開疯兼。冰浴30min，每隔5min劇烈振蕩混勻10～20s贫途， 4℃13000g離心10 min吧彪。吸取上清至一預(yù)冷的離心管中待侵，即為細胞核蛋白。