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什么是ELISA--原理與分類
一、基本原理 1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay权洼，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法芹蟹。 這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面凳嘁，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體俘戈，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性溉潭，又保留酶的活性。在測定時少欺，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)喳瓣。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗
2022-05-23
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內(nèi)參抗體怎么選
內(nèi)參抗體可用于評價蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量赞别。此類對照可幫助確定樣品間表達水平的差異畏陕，以判斷是由細胞裂解物的實際蛋白水平導(dǎo)致，還是由上樣量的差異導(dǎo)致仿滔。 內(nèi)參抗體主要功能 （1）檢測整個WB流程是否正常 （2）檢測基因表達產(chǎn)物是否正確 （3）比較產(chǎn)物微量的相對變化 （4）評價各個上樣孔內(nèi)蛋白的總量是否基本一致 圖一示例 內(nèi)參抗體在目標(biāo)蛋白的免疫熒光研究中惠毁，也可以作為共染的陽性對照。內(nèi)參抗體分為未標(biāo)記型和標(biāo)記型崎页，標(biāo)記物包括生物素鞠绰、HRP、FITC飒焦、PE蜈膨、Cy染料和Alexa Fluor染料。
2022-05-11
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ELK Biotechnology歸納Elisa實驗中樣本的制備與保存
樣品收集注意事項 1. ? 樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃牺荠，若不能及時檢測强剥，請按一次使用量分裝 （ELK Biotechnology單指標(biāo)夾心法試劑盒，單孔標(biāo)準(zhǔn)上樣量為100μl?）例杰，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)拟晋，或-80℃(3個月內(nèi)檢測)，避免反復(fù)凍融侥丝。融化樣本在試驗前請再次離心以去除凍融后可能出現(xiàn)的沉淀物蛇狐。 2. ? 試劑盒檢測范圍不等同于樣本的濃度范圍，如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值贬打，請根據(jù)實際情況芥吧，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議查閱文獻后先做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù))融唬。 3. ? 若所檢樣本不在說明書所列樣本之中，建議做預(yù)實驗驗證其檢測有效性住卿。
2022-05-04
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通過兩種軟件計算ELISA結(jié)果
方法一：使用Curve Expert1.4軟件（點擊下載Curve Expert1.4） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線芋困，下面以“Curve Expert1.4”軟件為例，繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法如下矫迹； 1．啟動“Curve Expert” 2．X軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白值）利术，Y軸輸入所對應(yīng)的濃度值呈野，如圖： 3．單擊[運行] 按鈕，出現(xiàn)如下對話框 4．單擊[ok
2022-05-04
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ELISA實驗操作視頻
2022-04-26
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Westernblot實驗蛋白提取
貼壁細胞總蛋白提扔∪： 用TBS緩沖液潤洗貼壁細胞2-3次被冒，最后一次盡量吸干殘留液。加入適當(dāng)體積的細胞總蛋白提取試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)于培養(yǎng)板/瓶內(nèi)裂解3-5min轮蜕。期間反復(fù)晃動培養(yǎng)板/瓶昨悼，使試劑與細胞充分接觸。用細胞刮刀將細胞及試劑刮下跃洛，收集到1.5mL離心管中率触。冰浴30min，期間用移液器反復(fù)吹打汇竭，確保細胞完全裂解葱蝗。4℃13000g離心5min，收集上清细燎，即為總蛋白溶液两曼。 懸浮細胞總蛋白提取： 低速離心收集細胞玻驻，加入適當(dāng)體積的冷卻的PBS緩沖液重懸瞳胸，2000rpm離心10min，吸除上清狱诊。重復(fù)以上操作兩次村次，收集細胞沉淀。加入適當(dāng)體積的細胞總蛋白提取試劑(使用
2021-08-14
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引物干粉使用說明
(1)引物干粉開蓋前13000rpm件策，室溫離心1min痒弃。 (2)加入管壁上10倍nmole數(shù)值的水(μL)的DEPC水，渦旋混勻巩樟，瞬時離心仆扰。此為引物儲備液(100μM)，用后于-20℃保存艰捶。 *引物管上一般是3.0~6.0nmole祟放，加入十倍這個數(shù)值微升的水(30~60μL)。 (3)取一新1.5mL EP管伤主，加入380μLDEPC水衡喧，上下游引物儲備液各吸取10μL于新EP管中，渦旋混勻玫氢，瞬時離心帚屉。此為引物工作液(2.5μM)，可直接用于實驗漾峡，用后于4℃保存攻旦。
2021-08-14
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